Исследование пцр что это


Полимеразная цепная реакция в реальном времени — Википедия

В молекулярной биологии, ПЦР в реальном времени (или количественная ПЦР, англ. Real-time PCR, qPCR, qRT-PCR) — лабораторный метод, основанный на методе полимеразной цепной реакции, используется для одновременной амплификации и измерения количества данной молекулы ДНК. Метод ПЦР в реальном времени включает в себя одновременно детекцию и количественное определение (измерение непосредственно количества копий, либо измерение копий относительно внесённой ДНК или дополнительных калибровочных генов) специфической последовательности ДНК в образце[1].

Метод использует общие принципы ПЦР. Основное отличие состоит в том, что измеряется количество амплифицированной ДНК в реальном времени после каждого цикла амплификации. Для количественного определения используют два метода — флюоресцентные красители, интеркалирующие в двуцепочечные молекулы ДНК, и модифицированные олигонуклеотиды (ДНК-зонды), которые флюоресцируют после гибридизации с комплементарными участками ДНК.

Часто ПЦР в реальном времени комбинируют с ОТ-ПЦР (обратная транскрипция) для измерения малых количеств мРНК, что позволяет исследователю получать количественную информацию о содержании данной мРНК в клетке и, соответственно, позволяет судить об уровне экспрессии данного гена в отдельной клетке или ткани[2].

Процедура очень похожа на процедуру классической ПЦР, то есть присутствуют все стадии реакции — плавление или денатурация двухцепочечных ДНК при температуре 95˚C, отжиг праймеров (температура отжига зависит от используемых праймеров) и элонгация при температуре 72˚С, если используется Taq-полимераза. Принцип ПЦР в реальном времени заключается в детекции ПЦР-продукта по мере его накопления. Сегодня это возможно сделать благодаря высокоспецифичным флуоресцентным зондам. Существует два основных подхода генерации света у таких зондов — во время элонгации и отжига, но, в обоих случаях флуоресценция усиливается с каждым новым циклом. Таким образом, сила сигнала говорит о первоначальном количестве интересующей молекулы[3].

На начальных этапах флуоресценция слабая, так как продукта ещё не очень много, поэтому её трудно отличить от фона. По мере накопления продукта, сигнал растёт сначала экспоненциально, а затем выходит на плато. Выход на плато объясняется нехваткой того или иного компонента реакции — могут закончиться праймеры, нуклеотидилтрифосфаты, метка. Если продукта реакции накопилось слишком много, то лимитирующим фактором может стать фермент, и тогда зависимость количества продукта от цикла станет линейной. Стоит отметить, что в стандартной реакции ПЦР в реальном времени все образцы выйдут на плато и достигнут примерно одного уровня сигнала. Таким образом, конечная точка ничего не скажет о начальном количестве исследуемого образца. С другой стороны, в экспоненциальной фазе можно проследить отличия в скорости роста продукта. Различия в начальном количестве молекул влияют на количество циклов, необходимых для поднятия уровня флуоресценции выше уровня шума[4].

Количество циклов, необходимое для того, чтобы флуоресценция достигла порогового уровня (над шумом) называется СТ-величиной. Пороговый уровень — не строго определённая величина, может подбираться для каждого случая отдельно.

Однако СТ-величина может зависеть от многих случайных факторов, например чувствительности детектора, качество фильтра и так далее. Поэтому точно начальное количество интересующего продукта померить нельзя. Для решения этой проблемы существуют методы нормировки. Измеряют отношение количеств двух молекул в пробе. Нормируют обычно на продукты генов домашнего хозяйства — таких генов, количество которых в клетке всегда примерно одинаковое (Пример — ген infA, кодирующий фактор инициации трансляции у бактерий). Соотношение определяют по следующей формуле: [N0 ]A/[N0 ]B = (1+E)(CTB-CTA)

Где [N0 ]A и [N0 ]B — начальные количества двух образцов, CTB и CTА — соответствующие CT-величины, а E — эффективность ПЦР, которая часто приравнивается к 1 или 0.9[4].

Разнообразие зондов[править | править код]

Мечение двуцепочечной ДНК[править | править код]

В данном случае меткой служит химическое соединение, способное интеркалировать в двойную спираль ДНК. Такой зонд меняет свою конформацию при взаимодействии с продуктами ПЦР и становится флуорофором. Детекцию можно проводить в конце каждого цикла, перед стадией денатурации. Примером такой краски может служить широко используемый SYBR Green.

Метка, работающая в фазу элонгации[править | править код]

Существует другой способ использования зондов, к которым с 5’ и 3’ концов пришиты флуорофор и его гаситель. Если последовательность зонда не очень длинная, то даже в связанном с ДНК состоянии два химических реагента будут взаимодействовать друг с другом, и не будет испускаться флуоресценция. Во время элонгации ДНК полимераза, обладающая 5’-3’-экзонуклеазной активностью, по одному нуклеотиду диссоциирует зонд от ДНК-мишени. В результате этого процесса и флуорофор и его гаситель попадут в раствор, где вероятность нахождения этих веществ рядом будет небольшой, и флуоресценция восстановится[3].

Метки, работающие в фазу отжига[править | править код]
Флуорогенная шпилька[править | править код]

Флуорогенная шпилька — небольшая одноцепочечная молекула ДНК, которая в свободном состоянии способна образовывать [пространственную структуру| вторичная структура ДНК] — шпильку. На один конец цепочки пришивают флуорофор, а на второй — вещество, его гасящее. Последовательность зонда комплементарна ДНК-мишени, которую нужно детектировать. В таком случае те молекулы зонда, которые плавают в растворе, не будут давать флуоресцентный сигнал, а связавшиеся с молекулами ДНК будут претерпевать конформационные изменения, в результате которых произойдет пространственное разнесение флуроофора и его гасителя и восстановление флуоресценции. Детекцию целесообразно проводить после денатурации[3].

Метка, основанная на методе FRET[править | править код]

Другой вариант мечения вновь-образующегося ПЦР-продукта основывается на методе FRET. Основа этого метода — наличие двух зондов, которые связываются с ДНК-мишенью на небольшом расстоянии друг от друга. На 5’-конец одного зонда и 3’-конец второго пришиты флуорофор-донор и флуорофор-акцептор соответственно. При их близком расположении происходит следующее: флуорофор-донор поглощает свет определённой длины волны и испускает свечение в более длинноволновом спектре. Эту волну, в свою очередь, поглощает флуорофор-акцептор и испускает свет, который можно детектировать[3].

Можно также использовать несколько зондов, у которых флуорофоры имеют разные спектры испускания. В таком случае появляется возможность в одной пробирке детектировать сигнал от разных молекул ДНК. Метод носит название множественный ПЦР (multiplex PCR).

ПЦР в реальном времени с реакцией обратной транскрипции[править | править код]

Метод был изобретён для детекции количества ДНК в пробе, однако, последнее время все чаще используется немного видоизменённый количественный ПЦР для детекции РНК. Метод носит название ПЦР в реальном времени с реакцией обратной транскрипции (ОТ-кПЦР , RT-qPCR). Этот метод широко используется для характеризации или сравнения уровней мРНК в разных популяциях[5].

Прежде, чем проводить стандартный ПЦР в реальном времени, нужно провести реакцию обратной транскрипции, для синтеза кДНК. Реакция обратной транскрипции проводится с помощью фермента — обратной-транскриптазы (РНК-зависимой ДНК полимеразы, ревертазы). Реакцию можно проводить без добавления праймера, однако наибольшая эффективность достигается, когда праймер добавлен. Существует три основных типа праймеров:

  1. Олиго dT праймеры — гибридизуются с polyA последовательностью, которая есть на 3’ -конце многих эукариотических мРНК.
  2. Случайная последовательность. Обычно используют либо гексамеры, либо нонамеры. Такие последовательности могут транскрибировать все мРНК
  3. Ген-специфичные праймеры используются, когда исследуется мРНК, экспрессируемая с определённого гена[4].

Реакция обратной транскрипции — ключевой этап в данном подходе, так как количество кДНК должно соответствовать количеству изучаемой мРНК. РНК-молекула менее стабильна, чем ДНК, поэтому при выделении РНК и проведении ОТ-кПЦР нужно тщательно следить за чистотой процедур и не допускать попадания большого количества РНКаз.

Полуколичественная ПЦР[править | править код]

Полуколичественная ПЦР (semi-quantitative PCR) — немного модифицированный метод количественного ПЦР с реакцией обратной транскрипции. Он часто используется для сравнения экспрессии нескольких генов. В данном случае измеряют количество накопленного продукта только в одной точке — после остановки реакции. ПЦР реакция останавливается, когда предполагается, что накопление продукта находится в экспоненциальной фазе роста и ПЦР-продукт можно детектировать. Далее, после электрофореза или саузерн-блота, можно измерить разницу в экспрессии нескольких образцов[5]. Использование данного метода критикуется в профессиональной среде, т.к. данный метод подразумевает оценку "на глазок".

ПЦР в реальном времени широко используется для решения многих исследовательских задач в лабораториях. Кроме того, этот метод нашёл применение в медицине (для диагностики заболеваний) и в сфере биотехнологий (для определения содержания микроорганизмов в продуктах питания и растительных материалах; для детекции ГМО). Также кПЦР используется для генотипирования вирусов и других патогенов человека и определения их количественного содержания.

Диагностические исследования[править | править код]

Количественная ПЦР применяется для быстрого выявления генов или фрагментов ДНК, являющихся маркерами инфекционных заболеваний, генетических отклонений и т. д. Внедрение этого метода в клинические лаборатории значительно улучшило качество диагностики инфекционных заболеваний[6]. Кроме того, кПЦР используется в качестве инструмента для детектирования вновь возникающих заболеваний. Например, новых штаммов гриппа[7].

Использование кПЦР также позволяет проводить количественные измерения и генотипирование (характеристика штаммов) вирусов, например, вируса гепатита B[8]. Степень инфекции, которая оценивается, как число копий вирусного генома на единицу ткани пациента, имеет большое значение во многих случаях. Например, вероятность реактивации вируса простого герпеса типа 1 зависит от количества инфицированных ганглиев[9]. В зависимости от того, интегрировал ли вирус в геном пациента (как, например, в случае вируса папилломы человека) или нет, количественный анализ осуществляется с применением обратной транскрипции или без неё.

Количественная ПЦР также широко используется для детекции опухолевых клеток в материале из со́лидных опухолей[10][11] и даже при некоторых формах лейкемии[12][13].

Выявление циркулирующих опухолевых клеток[править | править код]

Рак молочной железы все ещё является наиболее частой причиной смерти среди раковых больных. Причём, часто смерть вызвана не только самой опухолью, но и возникшими метастазами. Сами метастазы возникают в результате того, что особенные клетки, способные к пролиферации, отделяются от опухоли, выходят в кровяное русло и вторично поселяются в какой-то части организма. Эти клетки называются циркулирующими стволовыми клетками (ЦСТ). Присутствие таких клеток в крови пациентов, больных раком молочной железы, как правило, связано с плохим прогнозом исхода терапии и выживаемости в целом, поэтому является очень важным диагностическим параметром. Но из-за очень низкого количества, выявление ЦСТ — является довольно трудной задачей. И кПЦР, как высокочувствительный метод, может быть использован для решения этой проблемы. Дело в том, что, как и все раковые клетки, ЦСТ имеют эпителиальной происхождение и, следовательно экспрессируют определённый набор генов, отличающийся от окружающих их клеток крови, имеющих мезенхимальное происхождение. Для применения этого метода необходимо определить набор генов-маркеров ЦСТ и оценить их уровень экспрессии[14].

В микробиологии[править | править код]

ПЦР в реальном времени также применяется для микробиологических работ в сфере безопасности продуктов питания, для оценки качества вод (питьевых и сточных) и в сфере здравоохранения[15]. Кроме того, данный метод используется для идентификации кишечной микрофлоры[16].

Научные исследования[править | править код]

В ходе проведения исследований, кПЦР в основном используется для проведения количественных измерений транскрипции генов. Данный метод широко применяется для оценки изменений во времени экспрессии определённого гена, например, в ответ на введение лекарственного средства или изменения условий окружающей среды . Он также используется для определения зиготности трансгенных животных, используемых в исследовании. Для решения некоторых задач данный метод специально модифицируется

кПЦР для определения количества малых ядрышковых РНК (мяРНК)[править | править код]

мяРНК отличаются по свойствам от мРНК тем, что имеют очень малую длину (около 22 нуклеотидов), не имеют консервативной последовательности на концах, при этом мяРНК одной популяции могут отличаться на один или несколько нуклеотидов. Для решения этих проблем используют подходы, основанные на добавлении небольшого участка ДНК (линкера) к кДНК в реакции обратной транскрипции. Затем проводится ПЦР в реальном времени стандартными способами с использованием праймеров, комплементарных линкеру[17].

ПЦР в реальном времени для измерения количества белка[править | править код]

Для измерения количества белка в клетке используют следующий подход:

  1. Создают два вида антител к целевому белку с пришитыми последовательностями ДНК таким образом, что при взаимодействии с белком, 3’ конец одной последовательности оказывается недалеко от 5’-конца второй ДНК последовательности.
  2. Получается, что каждой молекуле белка соответствует известная нам последовательность ДНК, количество которой потом можно анализировать с помощью классического кПЦР-анализа[18].

Обнаружение фитопатогенов[править | править код]

Агропромышленность стремится производить семена и рассаду, не содержащую патогенных микроорганизмов, с целью предотвращения экономических потерь и увеличения срока хранения. Поэтому были разработаны системы, позволяющие обнаружить небольшие количества ДНК фитофторы (Phytophthora ramorum), оомицетов и некоторых других патогенов, которые приводят к гибели дубов и других видов растений, в смеси с ДНК растения-хозяина. Возможность различить ДНК возбудителя и растения-хозяина основана на амплификации последовательностей ITS (internal transcribed spacer), внутренних транскрибируемых участков, расположенных в кодирующей области гена рибосомной РНК, которые характерны для каждого таксона[19].

Детекция генетически модифицированных организмов[править | править код]

кПЦР (с использованием обратной транскрипции) может быть использована для детекции ГМО (генетически модифицированных организмов), так как является более чувствительным по сравнению со многими другими методами. При этом специфические праймеры используются для амплификации промотора, терминатора или даже промежуточных последовательностей, используемых в процессе создания вектора. Так как процесс создания трансгенного растения обычно приводит к вставке более, чем одной копии трансгена, его количество также обычно оценивается с помощью кПЦР. При этом в качестве контроля используют растение, содержащее данный ген в единственном экземпляре[20][21].

  1. VanGuilder H. D., Vrana K. E., Freeman W. M. Twenty-five years of quantitative PCR for gene expression analysis (англ.) // Biotechniques (англ.)русск. : journal. — 2008. — Vol. 44. — P. 619—626. — doi:10.2144/000112776. — PMID 18474036.
  2. Nolan T., Hands R. E., Bustin S. A. Quantification of mRNA using real-time RT-PCR. (англ.) // Nat. Protoc. (англ.)русск. : journal. — 2006. — Vol. 1. — P. 1559—1582. — doi:10.1038/nprot.2006.236. — PMID 17406449.
  3. 1 2 3 4 Provenzano M., Mocellin S. Complementary techniques: validation of gene expression data by quantitative real time PCR. (англ.) // Advances In Experimental Medicine And Biology. — 2007. — Vol. 593. — P. 66—73. — doi:10.1007/978-0-387-39978-2_7. — PMID 17265717. [исправить]
  4. 1 2 3 Kubista M., Andrade J. M., Bengtsson M., Forootan A., Jonák J., Lind K., Sindelka R., Sjöback R., Sjögreen B., Strömbom L., Ståhlberg A., Zoric N. The real-time polymerase chain reaction. (англ.) // Molecular Aspects Of Medicine. — 2006. — April (vol. 27, no. 2-3). — P. 95—125. — doi:10.1016/j.mam.2005.12.007. — PMID 16460794. [исправить]
  5. 1 2 Bustin S. A. Quantification of mRNA using real-time reverse transcription PCR (RT-PCR): trends and problems. (англ.) // Journal Of Molecular Endocrinology. — 2002. — August (vol. 29, no. 1). — P. 23—39. — PMID 12200227. [исправить]
  6. ↑ Sails AD (2009). «Applications in Clinical Microbiology». Real-Time PCR: Current Technology and Applications. Caister Academic Press. ISBN 978-1-904455-39-4
  7. FDA Authorizes Emergency Use of Influenza Medicines, Diagnostic Test in Response to Swine Flu Outbreak in Humans. FDA News, April 27, 2009.
  8. Yeh S. H., Tsai C. Y., Kao J. H., Liu C. J., Kuo T. J., Lin M. W., Huang W. L., Lu S. F., Jih J., Chen D. S., Chen P. J. Quantification and genotyping of hepatitis B virus in a single reaction by real-time PCR and melting curve analysis. (англ.) // Journal Of Hepatology. — 2004. — October (vol. 41, no. 4). — P. 659—666. — doi:10.1016/j.jhep.2004.06.031. — PMID 15464248. [исправить]
  9. Sawtell N. M. The probability of in vivo reactivation of herpes simplex virus type 1 increases with the number of latently infected neurons in the ganglia. (англ.) // Journal Of Virology. — 1998. — August (vol. 72, no. 8). — P. 6888—6892. — PMID 9658140. [исправить]
  10. Cen P., Ni X., Yang J., Graham D. Y., Li M. Circulating tumor cells in the diagnosis and management of pancreatic cancer. (англ.) // Biochimica Et Biophysica Acta. — 2012. — December (vol. 1826, no. 2). — P. 350—356. — doi:10.1016/j.bbcan.2012.05.007. — PMID 22683404. [исправить]
  11. Young R., Pailler E., Billiot F., Drusch F., Barthelemy A., Oulhen M., Besse B., Soria J. C., Farace F., Vielh P. Circulating tumor cells in lung cancer. (англ.) // Acta Cytologica. — 2012. — Vol. 56, no. 6. — P. 655—660. — doi:10.1159/000345182. — PMID 23207444. [исправить]
  12. Brüggemann M., Gökbuget N., Kneba M. Acute lymphoblastic leukemia: monitoring minimal residual disease as a therapeutic principle. (англ.) // Seminars In Oncology. — 2012. — February (vol. 39, no. 1). — P. 47—57. — doi:10.1053/j.seminoncol.2011.11.009. — PMID 22289491. [исправить]
  13. DiNardo C. D., Luger S. M. Beyond morphology: minimal residual disease detection in acute myeloid leukemia. (англ.) // Current Opinion In Hematology. — 2012. — March (vol. 19, no. 2). — P. 82—88. — doi:10.1097/MOH.0b013e3283501325. — PMID 22314322. [исправить]
  14. Andergassen U., Kölbl A. C., Hutter S., Friese K., Jeschke U. Detection of Circulating Tumour Cells from Blood of Breast Cancer Patients via RT-qPCR. (англ.) // Cancers. — 2013. — 25 September (vol. 5, no. 4). — P. 1212—1220. — doi:10.3390/cancers5041212. — PMID 24202442. [исправить]
  15. ↑ Filion, M (editor) (2012). Quantitative Real-time PCR in Applied Microbiology.Caister Academic Press. ISBN 978-1-908230-01-0.
  16. Nobre Giselle, S. Miglioranz Lucia Helena. Probiotics: The Effects on Human Health and Current Prospects (англ.) // Probiotics. — 2012. — 3 October. — ISBN 9789535107767. — doi:10.5772/50048. [исправить]
  17. Benes V., Castoldi M. Expression profiling of microRNA using real-time quantitative PCR, how to use it and what is available. (англ.) // Methods (San Diego, Calif.). — 2010. — April (vol. 50, no. 4). — P. 244—249. — doi:10.1016/j.ymeth.2010.01.026. — PMID 20109550. [исправить]
  18. Swartzman E., Shannon M., Lieu P., Chen S. M., Mooney C., Wei E., Kuykendall J., Tan R., Settineri T., Egry L., Ruff D. Expanding applications of protein analysis using proximity ligation and qPCR. (англ.) // Methods (San Diego, Calif.). — 2010. — April (vol. 50, no. 4). — P. 23—26. — doi:10.1016/j.ymeth.2010.01.024. — PMID 20215017. [исправить]
  19. Baldwin B. G. Phylogenetic utility of the internal transcribed spacers of nuclear ribosomal DNA in plants: an example from the compositae. (англ.) // Molecular Phylogenetics And Evolution. — 1992. — March (vol. 1, no. 1). — P. 3—16. — PMID 1342921. [исправить]
  20. Holst-Jensen A., Rønning S. B., Løvseth A., Berdal K. G. PCR technology for screening and quantification of genetically modified organisms (GMOs). (англ.) // Analytical And Bioanalytical Chemistry. — 2003. — April (vol. 375, no. 8). — P. 985—993. — doi:10.1007/s00216-003-1767-7. — PMID 12733008. [исправить]
  21. Brodmann P. D., Ilg E. C., Berthoud H., Herrmann A. Real-time quantitative polymerase chain reaction methods for four genetically modified maize varieties and maize DNA content in food. (англ.) // Journal Of AOAC International. — 2002. — May (vol. 85, no. 3). — P. 646—653. — PMID 12083257. [исправить]
  • Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. — Москва: Мир, 2002. — 589 с. — ISBN 5030033289.

ru.wikipedia.org

как проводят анализ, когда назначают.

Еще совсем недавно, каких-нибудь десять лет назад при диагностике заболеваний, передающихся половым путем, в ходу были простые и бюджетные методики лабораторных исследований.

Они якобы давали исчерпывающее представление о возбудителях половых инфекций и их наличии в организме человека.

Трихомонаду и гонококк было принято искать в мазках.

Окрашены они были самыми разными красителями под самым простым световым микроскопом.

Разве что лаборант мог плеснуть иммерсионного масла для лучшей подсветки.

Никого особо не смущало, что красители меняют форму и подвижность тех же трихомонад.

После чего отличить их от патологически измененной клетки эндотелия весьма проблематично.

Хламидий, вернее антитела к ним, титровали из крови.

Уреаплазмы и микоплазмы выращивали колониями на твердых и жидких средах, по неделе ожидая, пока колонии заколосятся.

В целом их считали условными патогенами.

И предпочитали не замечать, пока не расцветала клиника урогенитальной инфекции или не вставал вопрос о бесплодии.

Метод ПЦР диагностики стал революцией в лабораторном деле.

Раз и навсегда она решила проблему сжатых сроков диагностического поиска.

Максимально приблизила ответ на вопрос “Что вызвало воспаление?” к первому визиту пациента к специалисту.

Сегодня никого не надо заставлять дожидаться ответов анализов по неделе.

И с замиранием сердца готовиться к худшему, временно вместо антибактериального или противовирусного лечения принимая успокоительные.

Содержание статьи

  •  Суть метода ПЦР
  •  Спектр применения ПЦР анализа
  •  Сбор материала для ПЦР анализа
  •  Что делать перед ПЦР исследованием
  •  Какие врачи берут ПЦР-анализы
  • Кому и когда необходим ПЦР анализ
  •  Особенности ПЦР диагностики
  •  ПЦР-диагностика: расшифровка
  •  Плюсы и минусы анализа ПЦР
  •  Вариации ПЦР методики
  •  Что означает ответ в бланке ПЦР

 Суть метода ПЦР

Если доступно отвечать на вопрос “ПЦР-анализ, что это такое?”, — то придется вспомнить следующее.

Всякое живое существо несет в себе наследственную информацию, которую получает от родителей и передает детям.

Это либо РНК (рибоксинуклеиновая кислота), либо ДНК (дезоксирибонуклеиновая кислота).

Либо и то, и другое, в одном существе в разных вариантах.

РНК – это одна цепочка нуклеиновых кислот, ДНК – две.

Собственно, вот эти цепочки или их обломки и ищут, когда ведется ПЦР-диагностика инфекций.

  • Так как генетический код уникален для разных видов инфекционных агентов, попасть впросак, как при световой микроскопии, то есть, принять один вид паразита за другой не представляется возможным. Такая точность называется сто процентной специфичностью.
  • Второй критерий, подтверждающий точность диагностики, – это чувствительность ПЦР-анализа. Она тоже не подкачала и составляет сто процентов.

По сути, этот параметр показывает, сколько микробов или вирусов, или их фрагментов должно попасть в образец для исследования, чтобы анализ мог отреагировать на их присутствие.

Когда проводят ПЦР-диагностику, для успешности достаточно даже обломков наследственного материала.

Это позволяет зафиксировать присутствие возбудителя в крови даже в прошлом (до полугода от того момента, как лекарства успешно справились с заразой).

Это делает ПЦР уникальным ретроспективным методом.

Для оценки ранее существовавших, но уже утраченных поводов для воспалений, с последствиями которых приходится иметь дело клиницистам (например, бесплодием).

То есть имеется бесплодная пара и все еще не ясно, в чем заключается причина проблемы.

На данный момент оба клинически здоровы, за исключением, скажем, изменений в спермограмме у мужчины.

С помощью ПЦР можно установить, какие именно инфекции присутствовали в организме мужчины за последние полгода и предположить, что именно они стали камнем преткновения.

 Спектр применения ПЦР анализа

Какие инфекции можно проверить ПЦР-анализом?

Да практически любые.

Острые, хронические, рецидивирующие, даже ранее существовавшие.

Бактериальные, грибковые, вирусные, протозойные.

Любой инфекционный агент, имеющий геном, можно засечь методом амплификации нуклеиновых кислот.

В половых и мочевыводящих путях, ухе, горле, носу, дыхательной системе, ЖКТ.

С любого участка тела, с которого удастся получить образец клеток.

Это дает методике очень широкий спектр применения.

Что касается забора образцов для исследования, пожеланием врачей-лаборантов остается предоставление тех тканей, в которых подозревается наличие возбудителя.

Хотя кровь и продолжает считаться универсальным материалом для анализа, не стоит пренебрегать исследованиями того, что получено непосредственно с “места событий”.

  • Если воспаление развивается в уретре или вышележащих мочевых путях предпочтительны соскобы эндотелия из нее или моча.
  • При наличии вульвита – соскоб влагалищного эндотелия, цервицита – слизистой из шеечного канала.
  • Можно подвергнуть анализу простатический секрет, сперму, соскобы из прямой кишки, отделяемое конъюнктивы глаз, соскобы и мазки из ротоглотки, спинномозговую жидкость. И это только в урологии и гинекологии.
  • Реакцию используют во фтизиатрии для верификации возбудителей нетипичных пневмоний и туберкулеза.

Исследование может проводиться в день первого обращения к врачу, если будет произведен забор образцов.

Ответы выдаются в течение первых двух суток.

При необходимости в течение нескольких часов.

Таким образом, метод — экспресс-диагностика, сильно сокращающая сроки лечения и ускоряющая его начало.

 Сбор материала для ПЦР анализа

Стандартно выполняются соскобы и мазки у женщин на гинекологическом кресле.

У мужчин при урологическом осмотре.

Чаще всего это все же соскоб эндотелиальных клеток мочевыводящих путей.

При отсутствии воспалительных изменений болей при манипуляции нет.

Воспаленные слизистые более подвержены микротравмам и могут давать незначительные контактные кровотечения.

С ними ничего не нужно делать, проходят самостоятельно за несколько часов или суток.

Для женщин сначала выполняется забор проб из уретры, затем из влагалища и наконец из шеечного канала.

  • Цервикальный материал забирается тампоном-щеточкой или стандартным ватным тампоном, с которого пробу переносят в пробирку с транспортной средой.
  • Из уретры забор предусмотрен тампоном или бактериологической петлей из пластика.

Они вводятся на пару сантиметров и вынимаются с легким нажимом на стенки уретры.

Полученный образец также переносится в пробирку.

  • Соскоб из влагалища берется с использованием стерильного ватного тампона. При выборе участков забора образца предпочтение отдается измененной слизистой или заднему своду влагалища.

У мужчин соскоб предполагает использование урологического зонда.

Он вводится в мочеиспускательный канал на глубину 3-4 сантиметра и вынимается с легким нажатием на стенки уретры.

Образцы других биологических жидкостей и тканей берутся в лаборатории или на приеме у профильного специалиста.

  • Венозная кровь натощак утром или после шестичасового голодного промежутка в процедурном кабинете.
  • Сперма – в лаборатории собирается пациентом.
  • Мазки из прямой кишки, ротоглотки, отделяемое конъюнктивы – средним мед персоналом на приеме у врача.
  • Простатический секрет – на приеме у уролога после массажа простаты.
  • Для мочи предусмотрен сбор утренней порции в объеме 30-50 миллилитров после гигиенического туалета половых органов.
  • Мокрота собирается утром после питья небольшого количества теплой жидкости при отхаркивании в стерильную аптечную емкость.
  • Спинномозговая жидкость (ликвор) – при проведении пункции.

 Что делать перед ПЦР исследованием

Очень часто у пациентов клиник и лабораторий возникает масса вопросов по поводу того, как готовиться, ПЦР-анализ требует ли специальных мероприятий от пациента.

Чтобы исследование стало максимально достоверным, желательно соблюдение некоторых условий.

Подготовка к ПЦР крови и мазка включает следующие пункты.

  • За две недели не должны употребляться антибактериальные, противовирусные и противопротозойные лекарственные средства.
  • Перед тем, как берется мазок на ПЦР анализ, исключаются антисептики для местного применения. В том числе, в средствах для интимной гигиены.
  • Перед забором материала из мочеиспускательного канала следует не мочиться 2-3 часа до мероприятия.
  • Перед забором крови нельзя употреблять пищу, по крайней мере, на протяжении шести часов.
  • Перед исследованием эякулята секс противопоказан двое суток.

 Какие врачи берут ПЦР-анализы

Обычно это гинеколог, уролог и венеролог.

То есть специалисты, которым требуется чаще других сталкиваться со скрытыми вариантами или носительством инфекций, лечение которых нужно начинать как можно скорее.

Не менее редко в ПЦР нуждаются инфекционисты.

Особенно в случаях внутриутробных инфекций или других инфекционных процессах невыясненной этиологии.

Сколько по времени делается ПЦР-анализ, зависит от возможностей лаборатории и срочности, с которой нужно получить ответ.

Обычно это не более трех рабочих дней.

Кому и когда необходим ПЦР анализ

Стандартными ситуациями, требующими применения данного обследования, становятся:

  • Выявление при клиническом осмотре или в жалобах пациента признаков островоспалительных изменений мочеполового тракта.
  • Для верификации причины воспалительных явлений.
  • У пациентов с бесплодием для уточнения причин.
  • В ходе планирования беременности.
  • Во время наступившей беременности для женщин.
  • Планирование экстракорпорального оплодотворения.
  • Необходимость проконтролировать эффективность терапии венерического заболевания или носительства возбудителя ИППП (по истечении месяца от окончания терапевтического курса).
  • Необходимость первичного обследования для тех, у кого за последний год было два и более сексуальных партнеров. Подобный скрининг нацелен на выявление скрытых инфекций.

 Особенности ПЦР диагностики

Проявляемая анализом высокая чувствительность к половым инфекциям позволяет работать методикой при разных видах возбудителей.

Лучше всего выявляются уреаплазмы, микоплазмы, хламидии, а также вирусы папилломы, герпеса, гепатитов, ВИЧ, цитомегаловирус.

Есть возможность применить диагностическую тактику сразу после заражения.

В ходе исследования амплификатор периодически нагревает и охлаждает образцы с добавленными ферментами-ускорителями в пробирках.

На первом этапе расщепляют двойную цепочку ДНК искомого возбудителя.

Затем на ее короткий участок садятся два праймера (затравки) из стандартного набора, уникальные для данного возбудителя.

Для образования гибрида между матричной ДНК и праймером требуется повысить температуру.

После этого происходит удвоение участков ДНК инфекционного агента и их выделение электрофорезом и выявление.

В дальнейшем участок можно изучать и типировать.

Методика незаменима в ситуациях, когда возбудители не поддаются культуральному выращиванию, ускользают от серодиагностики.

Цена мазка и крови может несколько отличаться в разных клиниках и лабораториях.

Целесообразно, чтобы забор материала проводился в клинике, оснащенной лабораторными мощностями.

Это позволяет ограничить загрязнение образцов посторонними микробными примесями.

 ПЦР-диагностика: расшифровка

Анализ совмещает в себе достоинства качественного и количественного теста.

Качественные характеристики отражают в бланке отметками “не обнаружено”.

То есть ответ отрицательный

Или “обнаружено” при положительной пробе.

  • Отрицательному ответу соответствует ситуация, когда нет даже намеков на удвоение нуклеиновых цепочек даже при стимуляции ферментами-ускорителями. Это происходит, когда РНК или ДНК, характерные для искомого возбудителя, отсутствуют либо их количество находится за порогом чувствительности теста.
  • Положительные результаты приходят, если имеется разгар клинических проявлений инфекционного процесса или носительство инфекционного агента. После лечения половой инфекции положительный результат регистрируется на протяжении первых девяти месяцев в среднем (могут быть сокращения сроков до трех или удлинение до двенадцати месяцев).

Ложноотрицательный и ложноположительный анализ тоже возможны.

Сразу после лечения и в течение шести-девяти месяцев после его окончания диагностика может свидетельствовать о присутствии генетической информации возбудителя в крови или других средах и тканях организма.

По истечении указанного срока анализ становится отрицательным.

 Плюсы и минусы анализа ПЦР

  • Достоинством методики является то, что в отличие от культуральных методов исследования, для выявления инфекции не требуется накопления агентов в организме. А в отличие от серологических анализов крови нет необходимости выжидать выработки антител к антигенам бактерий, вирусов, грибов или простейших. От момента заражения можно проводить тестирование. Идеальным можно считать ситуацию, когда интерпретация результатов проводится в день обращения к врачу. ПЦР выигрывает сравнение с ИФА и посевом по всем показателям, кроме одного: способности принимать прошлую инфекцию за настоящую в связи с высокой чувствительностью.
  • Погрешности методики, приводящие к ложным результатам, в основном завязаны на неправильный выбор биологических образцов, удаленных от места воспалительных изменений или загрязнением их посторонней инфекцией в процессе забора или транспортировки, нельзя полностью полагаться на диагностику крови. Для половых инфекций предпочтительнее исследовать соскобы урогенитального эпителия.
  • Еще одним аспектом становятся погрешности на этапе выполнения лабораторного этапа: старое оборудование, недостаточная квалификация персонала.
  • Поэтому всегда предпочтительнее выбирать для исследования клинику с репутацией. Оснащенную современным оборудованием и расходниками и совмещающую в себе консультативный прием специалистов и лабораторные мощности.

 Вариации ПЦР методики

Существуют различные модификации полимеразной цепной реакции, направленные на улучшение результативности.

    • Количественная проводится с использованием маркеров ДНК (зондов), которые в реальном времени позволяют подсчитать количество полученного в результате анализа продукта. Участки ДНК, исполняющие роль зонда, иногда заменяют флуоресцирующим красителем, который сильнее светится на меченых участках, удваивающихся ДНК.
    • Вариант молекулярных колоний задействует акриламидный гель, благодаря которому образуются молекулярные колонии в точках, где есть искомые ДНК.
    • Ступенчатая ПЦР позволяет избегать неспецифичного связывания фрагментов ДНК.
    • RAPD используют, когда исследуемый материал может содержать сходные геномы близкородственных организмов и их требуется различить.
    • Вложенная позволяет с помощью двух пар праймеров провести две реакции, удвоив не только первичную матрицу, но и продукты ее амплификации.

Выбор методик обусловлен в лабораториях и клиниках обычно не только диагностическими потребностями, но и существующими возможностями.

То есть наличием или отсутствием расходных материалов, используемых в различных модификациях исследований.

 Что означает ответ в бланке ПЦР

Отправляясь на обследование, проходя его или получая ответ анализа на руки, не нужно думать, что результат автоматически равняется диагнозу.

Целый ряд обстоятельств может сопровождать присутствие в организме инфекционного агента.

ПЦР определяет не только живой, но и погибший после медикаментозного лечения биологический материал.

Правильно расшифровать и истолковать данные анализов может только грамотный врач-клиницист.

Нельзя пренебрегать полноценной консультацией, лишь обратившись в лабораторию и выполнив исследование.

Каждое заболевание требует полноценного подхода: поиска его причины, разработки тактики лечения и достижения результатов.

Максимально коротким этот путь становится только при содействии врача.

Он в состоянии не только подобрать лечение, но и провести его коррекцию в случае необходимости, а также проконтролировать результаты и эффективность терапии.

Большой процент половых инфекций существует в скрытых, хронических формах или объединяется с другими представителями соей группы.

Хламидиям могут сопутствовать трихомонады и гонококки, гепатитам — ВИЧ и туберкулез, герпесу — папилломавирус.

Даже скудная симптоматика хронических инфекционных процессов или ее отсутствие – не гарантия латентного периода инфицирования или отсутствия позднейших осложнений.

Попытки отмахнуться от проблемы или сэкономить на ее решении часто оборачиваются не только лишними затратами времени и денежных средств.

Но и потерями репродуктивных возможностей и сексуального здоровья.

Рационально выбирая врача, а не только клинику и лабораторию, вы решаете задачу сохранения здоровья максимально эффективно.

При необходимости сдать ПЦР анализ обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

onvenerolog.ru

Полимеразная цепная реакция (ПЦР анализ): описание метода, диагностика

ПЦР анализ, или полимеразная цепная реакция, — метод ДНК — диагностики, основанный на многократном увеличении молекул ДНК и РНК, характерных для того или иного патогенного микроорганизма. Для увеличения скорости копирования нуклеиновых кислот используются ДНК и РНК ферменты.

ДНК — диагностика: ПЦР анализ, достоинства метода

ДНК — диагностика — это один из наиболее современных, высокотехнологичных методов исследования в лабораторной диагностике.

  • Полимеразная цепная реакция, или ПЦР анализ, позволяет выявить в организме человека многие инфекционные заболевания, которые были вызваны вирусами  или возбудителями бактериальной природы.
  • С помощью данного анализа можно обнаружить болезни не только в острой стадии, но и во время инкубационного (скрытого) периода.

Данный метод исследования обладает многими преимуществами:

  • Возможность обнаружить конкретного возбудителя и целого ряда микроорганизмов;
  • Высокая точность: вероятность ложных результатов ничтожно мала;
  • Диагностика скрытых, вяло текущих заболеваний, не беспокоящих какими-либо проявлениями;
  • Быстрое получение результатов;
  • Использование биологического материала различного рода: крови, плазмы, сыворотки крови, мочи, кала, биологических  жидкостей, мокроты, слизи, выделений;
  • ПЦР анализ может быть качественный и количественный, то есть, не только выявлять вид возбудителя болезни, но и давать информацию о его количественном содержании в организме.

Описание, анализ крови методом ПЦР 

Одним из самых распространенных видов исследования является анализ крови методом полимеразной цепной реакции, ПЦР;

  • Анализ методом ПЦР основан на обнаружении в материале исследования небольшого фрагмента ДНК возбудителя той инфекции, которую подозревает врач.
  • В устоявшейся клинической практике ПЦР  анализы обычно сдают блоками, на определенные группы конкретных возбудителей. Например:

ПЦР — диагностика инфекций, передающихся половым путем, где одновременно выявляются:

ПЦР — диагностика бактериальных инфекций:

ПЦР — диагностика  вирусных инфекций,   ( вирусных гепатитов, герпеса и других ).

ПЦР — диагностика острых кишечных и респираторных инфекций, коронавируса.

Другие анализы методом ПЦР

Для данного анализа можно исследовать ряд других жидкостей организма: например, сок простаты, плевральную жидкость, спинномозговую, околоплодную, суставную, слюну и др..

  • Исследование практически не имеет отличий от анализа крови.
  • Происходит клонирование фрагментов нуклеиновых кислот различных возбудителей, методом полимеразной цепной реакции, ПЦР.
  •  На основе полученного результата специалисты делают вывод о наличии у человека какого-либо заболевания.

Полимеразная цепная реакция, анализ кала

Услышав жалобы на понос, рвоту, боли в животе, лечащий врач может направить клиента на сдачу ПЦР анализа кала.

  • На данный метод исследования затрачивается сравнительно небольшой промежуток времени.
  • Результаты пациент узнает уже через несколько часов.
  • Основными рекомендациями для получения достоверного результата является стерильность контейнера, в который будет помещен биологический материал,
  • а также исключение использования медикаментов, способных повлиять на работу кишечника или изменить окрашивание кала.

Проведение анализа мочи на ПЦР

  • Выявление инфекций, передающихся половым путем, чаще всего осуществляется посредством ПЦР исследования мочи.
  • Этот метод позволяет диагностировать, к примеру, вирус иммунодефицита человека, наличие в организме микроорганизмов рода Кандида.
  • Главным условием сдачи ПЦР анализа мочи является воздержание от половых контактов.
  • Женщинам также не следует сдавать мочу во время менструации.

Видео, ПЦР, полимеразная цепная реакция

Диагностика вирусных и бактериальных инфекций методом ПЦР

ПЦР диагностика позволяет выявить в организме наличие следующих инфекций:

  • Туберкулез;
  • вирус Эпштейна-Барра;
  • Токсоплазмоз;
  • Листериоз;
  • Опоясывающий лишай;
  • Цитомегаловирус;
  • Хламидиоз;
  • Клещевой энцефалит и многие другие;
  • При помощи ПЦР возможна диагностика вирусных гепатитов.
  • ВИЧ, вирус иммунодефицита человека, также может быть диагностирован посредством ПЦР теста.
  •  Данный метод обследования используется, например, для обнаружения ВИЧ у ребенка зараженной матери.

Высокая точность анализа ПЦР

Степень достоверности результата зачастую зависит от подготовки пациента.

  • Результат проведенного исследования всегда однозначен: либо отрицателен, либо положителен.
  • Но специалист не может поставить точный диагноз, руководствуясь только результатом теста ПЦР.
  • Он используется в качестве дополнительного обследования.
  • Для анализа крови методом ПЦР используется кровь, взятая из вены.

  • Причем, в случае, когда полимеразная цепная реакция проводится на ранних стадиях заболевания, есть вероятность ложноотрицательного результата.
  • Тогда необходимо повторное проведение процедуры через определенный период.

ПЦР анализ на ВИЧ и вирус герпеса

  • Методом ПЦР можно определить наличие ВИЧ-инфекции в организме.
  • Наличие ВИЧ — инфекции  также является одним из условий, при которых необходима сдача ПЦР анализа на вирус герпеса.
  • Обследование поможет обнаружить вирусную нуклеиновую кислоту за небольшой промежуток времени.
  • Для проведения исследования дополнительно может использоваться такой биологический материал, как мазок из уретры.
  • Перед процедурой отбора пациенту следует воздержаться от мочеиспускания в течение нескольких часов.

Диагностика туберкулеза методом ПЦР

Туберкулез также можно выявить по результатам анализа крови методом ПЦР.

  • Лечащие врачи дают пациентам направление на данное обследование для уточнения диагноза в спорных случаях.

Когда показан анализ ПЦР при беременности

  • ПЦР анализ как метод, используемый для диагностики огромного количества болезней, является обязательным для женщины во время беременности.
  • Обследование проводится для того, чтобы понять, имеет ли место угроза для нормального развития плода.
  • Обследование такого рода может быть назначено как в виде плановой процедуры, так и в случае, когда имеется подозрение на наличие каких-либо заболеваний.
  • Специалист может по результатам полимеразной цепной реакции сделать вывод о развитии определенных патологий в организме беременной женщины, а также о риске заражения плода.

Видео, ПЦР анализ на инфекции, зачем сдавать

Подготовка к проведению ПЦР анализа

Для максимально точного результата исследования клиент должен подготовиться процедуре отбора биологического материала. Среди рекомендаций по подготовке к сдаче крови выделяют:

  • Исключение тяжелых физических нагрузок;
  • Употребление «правильной» пищи (отсутствие в рационе алкоголя и жирной пищи).

Для продуктивной сдачи мочи необходимо:

  • Использовать стерильный контейнер для переноса жидкости;
  • Отбирать биологический материал утром, сразу после пробуждения;
  • Воздержаться от половых связей за несколько дней до процедуры.

Подготовка к отбору мазка включает в себя:

  • Гигиену половых органов с помощью обычной проточной воды, при отсутствии ароматных моющих средств;
  • Воздержание от мочеиспускания за некоторое время до сдачи биологического материала.

Видео, полимеразная цепная реакция в картинках

Навигатор по сайту

Общий анализ крови

Анализы, которые покажут рак

Генетические анализы

Биохимические анализы, когда они нужны

Анализы на гормоны

Самые точные анализы на инфекции и на паразитов

Иммуноферментные анализы в диагностике 

analyzekrovi.ru

Результаты ПЦР: расшифровка и интерпретация.

Результаты ПЦР и особенности их расшифровки интересуют многих людей, чьим диагнозом является подозрение на ЗППП.

Как отмечают доктора, метод обладает высокой результативностью и минимальным процентом ошибок. Поэтому зачастую используется как контрольный в диагностике инфекционных процессов.

В чем состоит суть ПЦР методики, хотят знать больные люди, и благодаря чему обеспечивается высокая вероятность получения верных результатов. Как расшифровываются полученные итоги, и есть ли связь между этим методом и другими способами диагностики?

Содержание статьи

  • Суть метода ПЦР
  • Какие материалы можно использовать для ПЦР
  • Что значит положительный результат ПЦР
  • Что значит отрицательный результат ПЦР
  • Кто из докторов выполняет расшифровку результатов ПЦР
  • Когда показатели ПЦР становятся положительными после заражения
  • Вид бланка анализов на ПЦР
  • Вероятность ошибочных итогов при ПЦР
  • Связь ПЦР с другими методиками

Суть метода ПЦР

ПЦР-методика – исследование, используемое довольно широко в современном мире. Диагностика позволяет поставить диагноз не только при инфекционных процессах, но и при генетических патологиях, некоторых онкологических недугах. Изначально ПЦР изобреталась не для применения в медицине.

В отрасль здравоохранения метод пришел из области молекулярной биологии, в которой активно использовался после своего открытия. Ученый, создавший ПЦР, получил нобелевскую премию.

Прежде чем разбираться, как расшифровывать результаты анализов ПЦР, необходимо понять, в чем основная суть методики.

На самом деле на словах все выглядит довольно просто. У пациента берется биологический материал. Затем он обрабатывается особым образом с помощью специальных химических реагентов.

Затем получившуюся смесь помещают в особую машину, которая проводит процесс амплификации. То есть многократного умножения определенных фрагментов ДНК или РНК, что удалось выявить с помощью добавления реагентов.

Когда процесс амплификации подойдет к концу, доктору остается только идентифицировать полученные результаты, чтобы поставить верный диагноз.

Главное – проявить внимательность на этапе идентификации. Но учитывая, что сегодня большую часть работы делает компьютер, все сильно упрощается.

ПЦР отличается высокой эффективностью. Ее широко применяют для того, чтобы определять наличие в организме скрытых инфекционных процессов, которые не дают положительных серологических реакций. Также скрытые инфекции обычно нельзя выявить с помощью посева или микроскопии. Поэтому зачастую ПЦР – единственный достоверный способ постановки диагноза в этом случае.

Какие материалы можно использовать для ПЦР

Часто удачность исследования зависит от того, как и какой материал брался для выполнения анализа. Однако в случае с полимеразной цепной реакцией расшифровка результатов ПЦР исследований мало зависит от биологического материала, который брался у пациента. Гораздо большее значение имеет подготовка к обследованию с помощью метода.

В качестве материала могут служить:

  • кровь, сдаваемая в соответствии со стандартными рекомендациями из вены на локтевом сгибе
  • мокрота, собираемая при откашливании
  • налет с ротовой полости, собираемый доктором в утреннее время, пока пациент еще не завтракал и не чистил зубы
  • мазок с половых органов, дающий хорошие результаты в том случае, если больной не мочился в течение нескольких часов, отказывался от сексуальных контактов несколько дней и соблюдал ряд других рекомендаций
  • исследование мочи, при котором биоматериал также предпочтительно собирать с утра, не проводя накануне гигиену половых органов
  • биоптаты органов или тканей, получаемые с помощью специальных инструментов и др.

Как отмечают врачи, материалом для ПЦР может быть совершенно любая жидкая среда организма человека.

При выборе главное помнить о том, что предпочтение отдают той среде, где с большей долей вероятности будет присутствовать возбудитель. Например, при половых инфекциях целесообразнее брать мазок с половых органов или кровь, чем мазок из ротовой полости.

Решать вопрос о том, какие материалы используются для получения результатов ПЦР в том или ином случае, лучше всего с лечащим врачом на приеме. Доктор сделает оптимальный выбор, исходя из предполагаемого у пациента заболевания.

Что значит положительный результат ПЦР

ПЦР – метод, который может похвастаться своей высокой специфичностью.

Предположим, доктор поставил себе цель обнаружить какой-то патогенный микроорганизм в теле пациента. И если тот на самом деле присутствует в теле, он будет обнаружен. При этом спутать его с каким-либо другим патогеном благодаря уникальному коду ДНК будет невозможно.

Если ПЦР положительный, значит, в организме с вероятностью почти в 100% находится возбудитель, поиск которого проводился врачом. Ведь методика рассчитана, в отличие от многих других диагностических методов, именно на поиск самих возбудителей, а не их следов.

Как отмечают доктора, при данном исследовании вероятность случайно принять один возбудитель за другой сводится к нулю. Зато существует вероятность получения положительных результатов после терапии.

Если в организме будут оставаться обломки нуклеиновых кислот. Однозначно положительной реакция чаще всего бывает, если пациент предъявляет жалобы на какие-то конкретные симптомы инфекционного процесса. Причем результат будет сохраняться даже в течение нескольких месяцев после того, как возбудитель будет полностью побежден и удален из организма.

Что значит отрицательный результат ПЦР

Если ПЦР результат отрицательный, значительное число пациентов автоматически считают, что они здоровы. Это практически правильное решение.

Ведь если итоги оказались отрицательными, значит фрагменты патогенного микроорганизма не были определены тест-системой. Из этого следует логичный вывод, что микроорганизма в теле нет.

Однако стоит учитывать, что несмотря на всю свою высокую чувствительность и специфичность, методика имеет определенный порог чувствительности. Если концентрация возбудителя на момент обследования не переходит границу этого порога, результат будет расцениваться, как отрицательные. Хотя на самом деле окажется ложным до поры до времени.

Доктора акцентируют особое внимание на том, что отрицательный результат не всегда означает отсутствие патологии. Чтобы на 100% быть уверенным в своем здоровье, пройти исследование повторно рекомендуется через несколько недель, а порой и месяцев.

Кто из докторов выполняет расшифровку результатов ПЦР

Часто среди пациентов звучит вопрос о том, какой врач будет проводить расшифровку ПЦР исследования.

В первую очередь необходимо запомнить, что доверять результаты стоит тому же медицинскому работнику, что первоначально давал направление на исследование. Связана эта рекомендация с тем, что в этом случае доктор будет представлять себе, что он ожидает увидеть в анализах. Сможет грамотно интерпретировать итоги, соотнося их с клинической картиной.

Получить направление наиболее часто можно от уролога, гинеколога или венеролога. Соответственно, после получения итогов относить бланк с результатами стоит кому-то из них. Важно помнить, что ПЦР – довольно дорогой метод диагностики. Его не принято использовать просто так, без специальных показаний к обследованию.

Среди них:

  • появление специфических для ЗППП симптомов
  • обследование перед планированием беременности или процедурой искусственного оплодотворения
  • поиск причин бесплодия и другие показания

Когда показатели ПЦР становятся положительными после заражения

Часто пациенты задают на приеме у медицинского работника вопрос о том, когда результаты ПЦР крови и мазков становятся положительными после заражения. Все зависит от того, насколько быстро конкретная инфекция сможет, размножаясь, пройти пороговую для теста концентрацию в материале.

Преимуществом ПЦР является то, что порог чувствительности у теста довольно низкий. Это значит, что выявить признаки заражения можно даже в том случае, если количество возбудителя в биологическом материале будет минимальным.

Подобная особенность дает возможность постановки диагноза даже в период инкубации, когда симптомы еще полностью отсутствуют.

Однако осечка возможна и при применении ПЦР методики. Это происходит, например, если пороговая концентрация все же не успела достичь определяемых тестом значений. В этом случае велика вероятность получения далеких от правды результатов.

Вид бланка анализов на ПЦР

Вопрос о том, как выглядит бланк результатов анализов ПЦР, весьма актуален.

Как отмечают доктора, ничего сложного во внешнем виде бумаги нет. Зачастую на документе можно обнаружить название искомого возбудителя. А напротив него пометку «обнаружен» или «не обнаружен».

В первом случае пациенту рекомендуется озаботиться собственным здоровьем. Так как анализ расценивается как положительный, а человек, как зараженный. Следовательно, ему требуется терапия.

Во втором случае чаще всего состояние пациента оценивают, как здоровое, хотя могут быть и исключения. Важно помнить, что количество возбудителей, указанных на бланке, зависит во многом от того, какое конкретно вид анализа применялся.

Если проводился поиск только одного патогенного микроорганизма, в результате будет фигурировать только его название с соответствующей пометкой. Если ПЦР проводилось сразу на несколько инфекций, что тоже возможно, в бланке будет список патологий с пометками.

Сегодня в лабораториях при комплексном анализе на группу инфекций не принято выдавать на каждый патогенный микроорганизм отдельный бланк. Их все указывают на одном листе.

Вероятность ошибочных итогов при ПЦР

Часто пациенты интересуются вопросом о том, возможно ли получение ложных результатов обследования при использовании методики. К сожалению, как отмечают врачи, ошибки хоть и редко, но случаются.

Существует, например, вероятность получить ложноположительные результаты ПЦР сразу после лечения. Объясняется это очень просто.

Терапия уже окончена, возбудитель удален из организма и не может заражать новые ткани. Однако остатки ДНК или РНК еще могут циркулировать в крови или ином диагностическом материале. В этом случае тест-система будет улавливать их и воспринимать за полноценную патологию, выдавая ложноположительный итог.

Именно поэтому рекомендуется после терапии сдавать исследование несколько раз с разными промежутками времени. Только в этом случае итоги будут достаточно объективными.

Ложноотрицательные результаты анализов ПЦР после приема антибиотиков также возможны. Происходит это в том случае, если пациент, неверно используя препараты антибактериального ряда, смазал симптомы болезни.

Не позволил микроорганизму активно размножаться в теле, но при этом и не довел его уничтожение до конца. В этом случае количество возбудителей может упасть ниже пороговой концентрации чувствительности. Это и даст неверные результаты тестирования.

Связь ПЦР с другими методиками

С помощью метода ПЦР доктора нередко подтверждают или, напротив, опровергают результаты других методов обследования, используемых для диагностики ИППП.

Например, с этой целью может использоваться ИФА.

Бывает так, что ПЦР отрицательный, а ИФА положительный. Тогда больной оказывается в замешательстве относительно своего состояния.

Доктора рекомендуют не теряться, а сначала провести оба теста повторно. Если ИФА останется положительным, а ПЦР отрицательным, с большой вероятностью заболевание в организме пациента отсутствует.

Ведь иммуноферментный анализ направлен на реакцию антиген-антитело. И порой может принимать сходные по структуре антигены других возбудителей за искомый, выдавая ложноположительные результаты.

Вероятность того, что ИФА дало верный результате на второй раз, а ПЦР, напротив, выдало ошибку, например, из-за низкого титра возбудителя, сведена к минимуму. Это скорее казуистика, чем реальная клиническая практика.

Результаты ПЦР диагностики обладают высокой ценностью в диагностике большого количества различных патологий. В первую очередь методика является незаменимой при подозрении на различные ЗППП.

Если вам нужно сдать получить комментарии по результатам ПЦР, обращайтесь к автору этой статьи – венерологу в Москве с многолетним опытом работы.

onvenerolog.ru

ПЦР анализ

Название исследования Клинический материал Результат Срок испол. Цена
Хламидии
ДНК Chlamydia trachomatis соскоб урогенит. тракта, секрет простаты, сперма, моча, мазок с коньюнктивы, мазок из ротоглотки, синовиальная жидкость кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК Chlamydia trachomatis соскоб урогенит. тракта,  моча, мазок из влагалища кол. 3 р.д. 560,00р.
Микоплазмы
ДНК Mycoplasma hominis соскоб из урогенит. тракта секрет простаты, сперма, моча кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК Mycoplasma hominis соскоб из урогенитального тракта кол. 3 р.д. 360,00р.
ДНК Mycoplasma genitalium соскоб урогенит. тракта, секрет простаты, сперма, моча кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК Mycoplasma genitalium соскоб урогенит. тракта, моча, мазок из влагалища кол. 3 р.д. 560,00р.
Уреаплазмы
ДНК U.urealyticum / U. parvum соскоб из урогенит. тракта, моча, секр. простаты, сперма кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК U.urealyticum / U. parvum соскоб урогенит. тракта кол. 3 р.д. 420,00р.
Гарднереллы
ДНК Gardnerella vaginalis соскоб из урогенит. тракта кач. 2 р.д. 190,00р.
Трепонемы
ДНК Treponema pallidum соскоб из урогенит. тракта, секрет простаты кач. 2 р.д. 190,00р.
Нейссерии
ДНК Neisseria gonorrhoeae соскоб из урогенит. тракта, моча, секрет простаты, сперма кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК Neisseria gonorrhoeae соскоб из урогенитального тракта, моча, мазок из влагалища кол. 3 р.д. 630,00р.
Микобактерии
ДНК Mycobacterium tuberculosis complex секрет простаты, сперма, моча, мокрота, СМЖ, БАЛ, ПЖ, синовиальная жидкость кач. 2 р.д. 290,00р.
Стрептококки группы А
ДНК Streptococcus pyogenes (Стрептококки группы А) мазок из ротоглотки кач. 2 р.д. 290,00р.
Стрептококки группы В
ДНК Streptococcus agalactia (SGB) соскоб из урогенитального тракта, моча кол. 2-3 р.д. 260,00р.
ДНК Streptococcus agalactia (SGB) кровь с ЭДТА кол. 3 р.д. 630,00р.
ДНК Streptococcus agalactia (SGB) мазок из ротоглотки, мокрота, БАЛ, СМЖ кол. 3 р.д. 630,00р.
Листерии
ДНК Listeria monocytogenes СМЖ, АЖ кач. 2 р.д. 420,00р.
ДНК Listeria monocytogenes кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 420,00р.
ДНК Listeria monocytogenes кал кач. 3 р.д. 440,00р.
ДНК Bordetella pertussis/parapertussis/bronchiseptica мазок из носа/зева, аспират, мокрота, БАЛ кач. 3 р.д. 1260,00р.
ДНК Campylobacter species кал кач. 4 р.д. 440,00р.
ДНК Salmonella species кал кач. 4 р.д. 440,00р.
ДНК Shigella + E. coli (энтероинвазивные штаммы) кал кач. 4 р.д. 760,00р.
ДНК Salmonella/Shigella / Campylobacter / Adenovirus кал кач. 3 р.д. 830,00р.
РНК Rotavirus / Astrovirus / Norovirus / Enterovirus кал кач. 3 р.д. 950,00р.
Диарогенные эшерихиозы кал кач. 3 р.д. 730,00р.
Кандида
ДНК Candida albicans соскоб из урогенит. тракта кач. 2 р.д. 190,00р.
Токсоплазма
ДНК Toxoplasma gondii СМЖ, АЖ кач. 2 р.д. 390,00р.
ДНК Toxoplasma gondii кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 390,00р.
Трихомонады
ДНК Trichomonas vaginalis соскоб из урогенит. тракта, секрет простаты, моча кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК Trichomonas vaginalis соскоб из урогенит. тракта, моча, мазок из влагалища кол. 3 р.д. 390,00р.
Пневмоцисты
ДНК Pneumocystis jirovecii (carinni) мазок из ротоглотки, мокрота, БАЛ кач. 3 р.д. 320,00р.
Гепатит A
РНК HAV кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 440,00р.
Гепатит В
ДНК HBV биоптат кач. 7 р.д. 440,00р.
ДНК HBV кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 440,00р.
ДНК HBV кровь с ЭДТА кол. 7 р.д. 1420,00р.
ДНК HBV кровь с ЭДТА ген. 10 р.д 1160,00р.
ДНК вируса гепатита В (ДНК HBV), ультрачувствительный метод кровь с ЭДТА кач. 10 р.д 2100,00р.
Гепатит С
РНК HCV биоптат кач. 7 р.д. 440,00р.
РНК HCV кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 440,00р.
РНК HCV кровь с ЭДТА кол. 7 р.д. 1950,00р.
РНК HCV (типы 1,2,3) кровь с ЭДТА ген. 4 р.д 800,00р.
РНК HCV (типы 1а, 1b, 2, 3а, 4, 5, 6) кровь с ЭДТА ген. 10 р.д 1800,00р.
РНК вируса гепатита С (РНК HCV), ультрачувствительный метод кровь с ЭДТА кач. 10 р.д 1950,00р.
Гепатит D
РНК HDV биоптат кач. 7 р.д. 440,00р.
РНК HDV кровь с ЭДТА кач. 3 р.д. 440,00р.
Гепатит E
РНК HEV кровь с ЭДТА кач. 3 р.д. 780,00р.
Гепатит G
РНК HGV кровь с ЭДТА кач. 3 р.д. 440,00р.
Цитомегаловирус
ДНК Cytomegalovirus соскоб из урогенит. тракта, моча, мазок с коньюнктивы, мазок из ротоглотки, АЖ , СМЖ кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК Cytomegalovirus кровь с ЭДТА кол 4 р.д. 410,00р.
ДНК Cytomegalovirus кровь с ЭДТА (плазма) кол 10 р.д. 830,00р.
Вирус простого герпеса
ДНК Human herpes virus 1, 2 типов соскоб урогенит. тракта, мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ кач. 2 р.д. 190,00р.
ДНК Human herpes virus 1, 2 типов кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 360,00р.
Вирус герпеса VI типа
ДНК Human herpes virus 6 типа мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ кач. 2 р.д. 320,00р.
ДНК Human herpes virus 6 типа кровь с ЭДТА кол 4 р.д. 340,00р.
Вирус Эпштейна-Барр
ДНК Epstein-Barr virus мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ кач. 2 р.д. 370,00р.
ДНК Epstein-Barr virus кровь с ЭДТА кол 4 р.д. 410,00р.
Вирус Варицелла - Зостер
ДНК Varicella-Zoster virus мазок из ротоглотки, СМЖ, АЖ кач. 2 р.д. 360,00р.
ДНК Varicella-Zoster virus кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 360,00р.
Папилломавирус
ДНК ВПЧ 16 и 18 типов Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки - у женщин; уретра, крайняя плоть - у мужчин) кач. 3 р.д. 190,00р.
ДНК ВПЧ 6 и 11 типов Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки - у женщин; уретра, крайняя плоть - у мужчин) кач. 3 р.д. 190,00р.
Количество ДНК ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59,68 типы) Соскоб из урогенитального тракта женщин (цервикальный канал, шейка матки) кол. 5 р.д. 840,00р.
Количество ДНК ВПЧ 16 и 18 типов Соскоб из урогенитального тракта женщин (цервикальный канал, шейка матки) кол. 5 р.д. 440,00р.
ДНК ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59,68 типы) Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки - у женщин; уретра, крайняя плоть - у мужчин) кач. 3 р.д. 320,00р.
ДНК ВПЧ высокого риска (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56, 58,59 типы) Соскоб из урогенитального тракта (цервикальный канал, шейка матки - у женщин; уретра, крайняя плоть - у мужчин) ген. 5 р.д. 710,00р.
ВПЧ-тест расширенный (с определением кол-ва и типа вируса) Соскоб из цервикального канала комп. 3-7 р.д. 1260,00р.
ВПЧ-ПАП-тест (комплекс тестов ВЧП расширенный с определением кол-ва и типа вируса) Соскоб из цервикального канала (стекло + пробирка) комп. 3-7 р.д. 2840,00р.
ВПЧ-ПАП-тест жидкостный (комплекс тестов ВЧП расширенный с определением кол-ва и типа вируса и ПАП-тест) Соскоб из цервикального канала жидкостный комп. 3-7 р.д. 3360,00р.
ВПЧ-тест расширенный жидкостный (с определением кол-ва и типа вируса) Соскоб из цервикального канала жидкостный комп. 3-7 р.д. 1680,00р.
ПАП-тест жидкостный Соскоб из цервикального канала жидкостный   7 р.д. 2540,00р.
Энтеровирус
РНК Enterovirus СМЖ, мазок из ротоглотки кач. 3 р.д. 530,00р.
РНК Enterovirus кровь с ЭДТА кач. 4 р.д. 420,00р.
РНК Enterovirus кал кач. 4 р.д. 530,00р.
Аденовирус
РНК Adenovirus мазок из носа/зева, мазки с конъюнктивы, СМЖ кач. 3 р.д. 530,00р.
Вирусы гриппа А и В , парагриппа 1,2,3,4 типов
Вирус гриппа А и В (РНК Myxovirus influenza) отделяемое носоглотки кач. 2 р.д. 420,00р.
Вирус парагриппа 1,2,3,4 типов (РНК Parainfluenza virus 1,2,3,4) отделяемое носоглотки кач. 2 р.д. 480,00р.
РНК вирусов гриппа А и В, парагриппа 1,2,3,4 типов (РНК Myxovirus influenza, РНК Parainfluenza virus 1,2,3,4) отделяемое носоглотки кач. 2 р.д. 790,00р.
"Вирус гриппа А, А/h2N1/СА/2009, В" (свиной грипп) мазок из носа и зева кач. 2 р.д. 1160,00р.
Парвовирус В19
ДНК Parvovirus B 19 мазок из ротоглотки, слюна, АЖ кач. 3 р.д. 770,00р.
ДНК Parvovirus B 19 кровь с ЭДТА кол. 3 р.д. 420,00р.
ВИЧ (Вирус иммунодефицита человека)
ДНК HIV кровь с ЭДТА кач. 10 р.д. 1580,00р.
РНК HIV кровь с ЭДТА кол. 10 р.д. 4410,00р.
РНК/ДНК ВИЧ 1 типа, ультрачувствительный метод Очищенные сперматозоиды   10 р.д. 9450,00р.
Вирус краснухи
РНК вируса краснухи (Rubella virus) Кровь с ЭДТА кач. 3 р.д. 730,00р.
РНК вируса краснухи (Rubella virus) Мазок из ротоглотки, амниотическая жидкость (АЖ), спинномозговая жидкость (СМЖ, ликвор) кач. 3 р.д. 800,00р.
Респираторно-синцитиальный вирус
РНК респираторно-синцитиального вируса человека (hRSV) Мазок из носа/зева, аспират, мокрота,БАЛ кач. 2 р.д. 1260,00р.
КОМПЛЕКСНАЯ ДИАГНОСТИКА ОРВИ
Диагностика ОРВИ
РНК hRSv -  Respiratory Syncytial virus (респираторно-синцитиальный вирус человека)
РНК hMpv - Metapneumovirus (метапневмовирус человека)
РНК hСv- Coronavirus (коронавирус человека)
РНК hRv- Rhinovirus  (риновирус человека)
ДНК hAdv - Adenovirus B, C, E (аденовирус человека групп B, C и E)
ДНК hBv - Bocavirus (бокавирус человека)
РНК hPiv - Parainfluenza virus (вирус парагриппа человека 1, 2, 3 и 4 типов)
Мазок из носа/зева, аспират, мокрота,БАЛ кач. 2 р.д. 1680,00р.

rammedic.ru

Инфекции, которые определяет пцр анализ. Их диагностика и расшифровка

В последние годы медицина и наука совместно прикладывают большое количество усилий для того, чтобы своевременно диагностировать инфекционные заболевания и начинать их лечение еще на ранних стадиях. Во многом помогает в этом метод полимеразной цепной реакции, которая также известна под сокращенным названием ПЦР.

Многие пациенты интересуются, в чем суть исследования, и какие инфекции с его помощью можно диагностировать. Какой биоматериал можно использовать, и как приготовиться к прохождению анализа?

Суть ПЦР-методики

Первоначально ПЦР разрабатывался, как методика научных исследований. Ее активно применяли в молекулярной биологии для исследования различных процессов, происходящих с живыми организмами.

Только спустя приличный промежуток времени реакцию цепной полимеризации стали применять в медицине, как полноценный способ диагностики. Сегодня с ее помощью можно не только выявить острое заболевание. Но и определить хронический процесс, диагностировать генетические патологии. И, что особенно важно, определить наличие инфекции еще до того, как у человека появятся ее первые симптомы. То есть ПЦР остается рабочим методом даже в том случае, если инфекция находится в периоде инкубации.

В основе лежат методы молекулярной биологии, так как анализ пришел именно из этой научной сферы. В биологический материал пациента добавляют специальные реагенты. Они вступают в реакции с ДНК или РНК возбудителя.

То, с чем реагент вступит в реакцию, зависит непосредственно от того, какой материал содержится в исследуемых жидкостях или тканях. После того, как реакция стартовала, начинается копирование выявленных частиц возбудителя. Проходит копирование в несколько этапов, чтобы процесс был более легким. Как только умножение выявленных патологических фрагментов подходит к концу, лаборант, следивший за ходом исследования, может сравнить полученные данные со специальной базой данных. Именно на этом этапе и опознается возбудитель, спровоцировавший патологические изменения в организме человека.

Список выявляемых инфекций

ПЦР инфекции, выявляемые с помощью исследования, очень многообразны. Список включает множество позиций. Причем есть возможность поставить диагноз не только бактериальной, но и вирусной или грибковой инфекции. В результате ценность ПЦР как способа диагностики только возрастает.

С помощью методики диагностируют следующие заболевания:

  • Вирус иммунодефицита человека

ПЦР исследование при подозрении на заражение человека ВИЧ-инфекцией является едва ли не золотым стандартом. С его помощью удается обнаружить в организме этот опасный вирус, который приводит к сильнейшим изменениям в иммунной системе.

Выявить герпес с помощью этого подхода можно не только в стадии обострения, но и во время ремиссии заболевания. Что гораздо важнее, как говорят врачи, появляется также возможность точно определить генотип патогена. А значит и подобрать правильное лечение.

  • Различные инфекции мочеполовых путей

В это группу входят гонорея, микоплазмоз, уреаплазмоз, хламидиоз, трихомониаз и др. Список весьма обширен и включает в себя около 30 возбудителей. ПЦР методика постепенно вытесняет более классические методы, такие как микроскопия и посев. Объясняется это тем, что классические способы диагностики требуют большого количества времени. А оно может быть по-настоящему важным в лечении.

ПЦР на гепатиты позволило сделать настоящий прорыв в лечении этих опасных не только для здоровья, но и для жизни заболеваний. Сейчас без полимеразной реакции нельзя представить себе не только правильное определение вида вируса. Но и назначение адекватной терапии пациентам, столкнувшимся с этими вирусными болезнями.

  • Вирус папилломы человека

ВПЧ - еще один распространенный вирус, который диагностируется с помощью цепной полимеризации. Причем часто важно не просто определить наличие вируса, но и установить, что это за штамм. Исследование играет роль для представительниц прекрасного пола. Дело в том, что многие женщины страдают от ВПЧ, некоторые штаммы которого могут способствовать формированию рака шейки матки. Только своевременная диагностика и принятие мер помогут в этом случае избежать беды.

  • Цитомегаловирус

Цитомегаловирусная инфекция, как и ВПЧ, распространена довольно широко. Наибольшую угрозу она представляет для беременных женщин. Так как способствует рождению ребенка с различными дефектами, иногда вплоть до летального исхода. На цитомегаловирус и антитела к нему проверяют многих беременных представительниц прекрасного пола.

Полимеразная цепная реакция в диагностике этой болезни играет не последнюю роль.

Особенно важно это, учитывая тот факт, что туберкулез очень распространен. Он тяжело поддается лечению и часто характеризуется весьма скудной симптоматикой.

ПЦР чаще всего используют для того, чтобы подтвердить итоговый диагноз, который уже был заподозрен из-за положительной пробы манту. Естественно, список инфекционных болезней, выявляемых с помощью полимеразной реакции, далеко не полный. Доктор может назначать обследование и при подозрении на другие ЗППП или инфекционное поражение иных органов и тканей.

Какой биоматериал может использоваться

Как отмечают доктора, для подтверждения диагноза могут применяться самые разные биологические материалы.

Наиболее часто применяют:

  • Сыворотку или плазму крови, или саму кровь. В них выявляются ВИЧ, цитомегаловирус, все гепатиты, передаваемые половым путем, герпес. Также кровь берется в том случае, если необходимо определить генетические заболевания.
  • Соскобы с различных слизистых оболочек. Их особенно часто рекомендуют выполнять, например, при подозрении на заболевания, передающиеся половым путем. Эффективны соскобы со слизистых, если патогенные микроорганизмы поражают именно слизистые оболочки в первую очередь.
     

  • Различные биологические жидкости. Пациенту мужского пола может потребоваться сдать на анализ секрет простаты или сперму. Если речь о женщине, то у нее для исследования могут браться околоплодные воды во время беременности. У пациента любого пола берутся слюна, смыв с бронхов, суставная смазка и жидкость, находящаяся в спинном мозге.
  • Мокрота. Ее забирают для оценки в том случае, если подозревается легочная форма некоторых бактериальных заболеваний. Также ее обязательно исследуют при подозрении на туберкулезное поражение.
  • Моча. Ее исследование рекомендуется при многих урогенитальных исследованиях. У представителей сильного пола оценка мочи нередко может выступать вместо взятия соскоба с поверхности уретры, так как эта процедура травматична и весьма неприятна.
  • Биоптаты. Используются довольно редко. Их рекомендуют брать из желудка или двенадцатиперстной кишки в том случае, если у пациента есть подозрение на заражение хеликобактером.

Особенности подготовки к исследованию

Чтобы ПЦР анализ на инфекции оказался эффективным и достоверным, к его сдаче необходимо правильно подготовиться. Также рекомендуется соблюдать ряд правил при сдаче биоматериала, чтобы избежать столкновения с недостоверными результатами. Кровь всегда сдается по стандартной схеме.

Пациенту доктор советует прийти в больницу в утреннее время, на голодный желудок. Полученную кровь, плазму или сыворотку стараются в ближайшее время отправить в лабораторию.

Накануне исследования рекомендуется отказаться от слишком острых, соленых или жареных блюд, не пить алкоголь. Также пациентам рекомендуется избегать воздействия на организм стрессовых факторов. Чтобы сдать мочу, подготовка в принципе аналогична.

Дополнительно пациенту рекомендуется приобрести в аптеке специальный стерильный контейнер и наполнить его в соответствии с инструкцией, полученной от доктора. Использовать банки и другие нестерильные емкости для сдачи анализа нельзя!

Если емкость заполняется в домашних условиях, доставить ее больницу нужно максимум в течение двух часов. При этом нельзя допускать остывания емкости.

Соскоб со слизистых сдается всегда в условиях больницы. При этом как мужчинам, так и женщинам рекомендуется минимум на сутки отказаться от секса и не мочиться за 2-3 часа до сдачи анализа.

Важно помнить, что врач всегда даст подробную инструкцию относительно того, как правильно собирать материал для исследования. Если получить инструкцию от доктора не удалось, его всегда можно спросить, каких рекомендаций стоит придерживаться, чтобы результаты были достоверными.

Особенности расшифровки

Расшифровка результатов может показаться совсем простым делом. Ведь существует только два варианта ответа: положительный и отрицательный. Если результат отрицательный, значит человек, сдававший биологический материал, не заражен той инфекцией, проверку на которую он проходил. Если же результат положительный, значит инфекция присутствует в организме. И нужно как можно скорее начать терапию, чтобы с ней справиться.

Как отмечают доктора, расшифровка только кажется легким делом.

На самом же деле ее выполнение - дело непростое. Потому что необходимо учитывать хоть маленький, но риск ложноположительных и ложноотрицательных реакций. Только доктор, оценив симптомы болезни у конкретного пациента, его общее состояние и другие параметры, может сказать, насколько можно доверять полученным результатам. Если они оцениваются, как сомнительные, больного с большой долей вероятности отправят сдавать анализы повторно.

Точность методики

Многих пациентов интересует вопрос о том, насколько сильно можно доверять исследованию. Как отмечают врачи, это один из самых высокоточных методов диагностики различных инфекций, которые существуют на сегодняшний день. Его точность объясняется тем, что работа происходит с ДНК и РНК. А эти элементы строго индивидуальны для каждого вида патогенных микроорганизмов. Следовательно, риск ошибки сведен к минимуму.

Опираясь на полимеразную реакцию цепного типа, можно узнать:

  • есть в организме патогенные элементы, или они отсутствуют;
  • определить, что конкретно за инфекция стала причиной появления тех или иных симптомов;
  • поставить диагноз даже в том случае, если микробов или вирусов еще очень мало, и другими методами диагностики они не улавливаются.

Важно помнить, что даже ПЦР не дает 100% надежности. Существует риск столкновения с неверными результатами. И только врачебная оценка может помочь точно понять, стоит ли человеку начинать лечение. 

Преимущества и недостатки

Как и любой другой метод, ПЦР обладает своими преимуществами и недостатками. Преимуществ, как отмечают доктора, на сегодняшний день больше.

Среди них:

  • высокая чувствительность тестовых систем, позволяющая ставить диагнозы даже в сложных случаях, когда возбудитель еще находится в периоде инкубации;
  • высокая специфичность тестов, позволяющая точно понять, что за патоген стал причиной негативных процессов;
     

  • универсальность методики, заключающаяся в том, что с помощью одного метода можно без проблем провести исследование на разные микроорганизмы, используя один и тот же биоматериал;
  • быстрота исполнения, позволяющая получить результаты максимум через сутки после проведения анализа, а иногда и значительно быстрее;
  • возможность обследоваться на заражение сразу несколькими инфекционными заболеваниями без необходимости сдавать множество разных биологических материалов.

Несмотря на большое количество преимуществ, недостатки у ПЦР-метода также имеются. Во-первых, требуется хорошее техническое оснащение лаборатории. Во-вторых, лаборант должен быть хорошо обучен и обладать специфическими знаниями, чтобы не допустить ошибок в технологии. Если два этих условия соблюдаются, реакция цепной полимеризации становится эффективным способом постановки диагнозов!

www.venerologia.ru

нормы, расшифровка результатов, как и где сдавать

Существуют инфекции, носителями которых является большинство людей на планете, но они об этом даже не подозревают. Речь идет, например, о вирусах герпеса и гепатита, уреаплазме. И если о первых двух известно достаточно много, то о последнем широкая аудитория почти ничего не знает. А между тем болезнь может передаваться не только половым путем, но и бытовым. Это, конечно, сделало диагноз «уреаплазмоз» менее «постыдным» в глазах обывателя, но от того — не менее опасным.

Что это такое и чем грозит патологическая активность этой бактерии в клетках человека? Разбираемся в особенностях влияния инфекционного агента на внутренние органы и выясняем, где и какой анализ сдать на уреаплазму.


Что такое уреаплазма и когда стоит сдать биоматериал на анализ?

Уреаплазма — это паразитирующий одноклеточный микроорганизм, который, формально являясь бактерией, по свойствам схож с вирусами. Существует множество разновидностей уреаплазм, среди которых есть крайне опасные для человека — Ureaplasma parvum и Ureaplasma urealiticum . Они могут базироваться в клетках мочеполовой и мочевыводящей систем, а также в легочной ткани здоровых людей. По статистике около 60% женщин являются носителями этих микроорганизмов, и в большинстве случаев они не наносят вреда их здоровью. Однако из-за снижения иммунитета, особенно при незащищенных половых актах, уреаплазмы могут проявить патологическую активность и стать причиной уреаплазмоза.

Женщины чаще страдают от уреаплазмоза, чем мужчины, но опасности заражения могут быть подвержены и те, и другие. У представительниц прекрасного пола, помимо приведенного фактора, усиленное размножение Ureaplasma вызывают бактериальный вагиноз, воспалительные процессы шейки матки, маточных труб, яичников и другие болезни органов малого таза. У сильной половины человечества риск развития заболевания повышается при простатите, воспалении уретры и/или придатков яичек, нарушении сперматогенеза и т. д. Сильнее же всего на возникновение уреаплазмоза влияет зараженность хламидиозом и гонореей (у обоих полов). Патология может также передаваться от матери плоду.

Если не лечить уреаплазмоз, он может перейти в хроническую форму и причинить вред всему организму (привести к воспалению суставов, пиелонефриту и др.). Одним из самых неприятных последствий заболевания может стать бесплодие. Если же инфицированная женщина уже вынашивает ребенка, то велика вероятность выкидыша. Именно поэтому планирующим беременность и уже беременным женщинам обязательно назначают анализ на уреаплазму.

Кстати
Около 20% новорожденных инфицированы уреаплазменной инфекцией. Но зачастую дети, заразившиеся уреаплазмозом во время прохождения родовых путей матери, излечиваются от этой болезни без помощи врача — инфекция просто проходит сама при должном уходе за ребенком. К трем месяцам уреаплазмоз выявляют лишь у 5% детей. Новорожденным мальчикам проще, чем девочкам, — у последних в 30% случаев выявления заболевание все же приходится лечить.

Часто уреаплазмы могут длительное время никак не проявить свое присутствие в организме, и носитель даже не будет знать о заражении. Однако могут проявиться симптомы, очень похожие на признаки ЗППП: боль, зуд и жжение в мочеиспускательном канале и половых органах, возможны выделения с характерным запахом или без него. При таких жалобах врач может назначить больному один из анализов на уреаплазмоз: ПЦР, ИФА, бактериологический посев. Эти методы отличаются не только подходом к исследованию биоматериала, но также скоростью получения результата и уровнем точности.

Методы анализа

В зависимости от симптомов, врач решает, какой именно биоматериал сдать (кровь, мочу, мазок, соскоб) и каким методом его нужно будет исследовать. Расскажем подробнее о наиболее достоверных и часто назначаемых типах анализов биоматериала на уреаплазмоз.

  • Культуральный метод (бактериологический посев) . Этот метод анализа используется для выявления уреаплазмы чаще других. Его суть — в помещении биоматериала (мазка с шейки матки или со слизистой оболочки уретры, реже — мочи или секрета простаты) в специальную питательную среду. Если в материале есть уреаплазмы, они начинают активно размножаться, что и фиксирует специалист. Также бакпосев используют для определения чувствительности возбудителей инфекции к различным видам антибиотиков (для назначения конкретного препарата). Этот метод обладает высоким уровнем точности, но результатов придется ждать довольно долго — от 4 до 8 дней.
  • ПЦР . Полимеразная цепная реакция — один из самых точных (чувствительность метода около 98%) и быстрых анализов на уреаплазмоз на сегодняшний день. Результат лабораторного исследования можно получить в течение четырех часов. Для анализа обычно берут выделения из влагалища, мочу. ПЦР позволяет найти в организме участки РНК возбудителя заболевания, даже если микроорганизмы содержатся в пробе в мизерных количествах. Однако у метода есть свои минусы: он не дает (в отличие от посева) информации об активности уреаплазм, может оказаться ложноположительным (при загрязнении пробы) или ложноотрицательным (если человек проходил курс лечения антибиотиками менее чем за месяц до исследования).
  • ИФА. Иммуноферментный анализ проводится путем помещения биоматериала (в данном случае — крови) на специальную полоску с антигенами возбудителя болезни. Исследование показывает не наличие самих микроорганизмов, а присутствие в пробе антител. Для каждой инфекции вырабатываются особые иммунные белки, поэтому диагноз по результату анализа можно ставить с большой долей точности. Для получения результатов требуется обычно не более одного дня. Недостаток исследования в том, что антитела организм вырабатывает не всегда, могут быть сбои, и инфекция останется не обнаруженной.

Есть еще один вид исследования — серологический анализ, но из-за низкой точности его обычно заменяют или дополняют одним из перечисленных. Все эти методы анализов на уреаплазму считаются точными и достоверными. Хотя последний показатель сильно зависит от качества биоматериала, на которое в том числе влияет тщательность соблюдения пациентом правил подготовки к исследованию.

Как сдавать биоматериал на анализ

Если пациент сдает кровь, процедуру проводят натощак, утром. Мочу на выявление уреаплазмы также собирают утреннюю (нужно, чтобы она находилась в мочевом пузыре не менее пяти–шести часов). При сдаче соскоба из уретры мужчине придется воздержаться от похода в туалет за два часа до исследования. Женщинам соскоб не делают (как и не берут мазок) во время менструации, предпочтительна середина цикла. Представителям обоих полов следует избегать половых контактов за два-три дня перед анализом.

Для сдачи мазка или соскоба гигиену половых органов пациент может провести вечером накануне анализа, но не позже. Не стоит использовать какие-либо мази и гели.

Для дам есть и дополнительные правила. За несколько дней до сдачи мазка на уреаплазмоз нельзя пользоваться местными контрацептивами (свечи, мази, вагинальные таблетки), делать спринцевания, подмываться горячей водой.

И женщинам, и мужчинам необходимо помнить, что при сдаче любого анализа на уреаплазмоз нельзя принимать антибактериальные и противовирусные препараты. Если же прием таких средств имел место менее чем за месяц до исследования, необходимо предупредить об этом врача.

Расшифровка анализа на уреаплазмы: норма и патологии

После того как пациент сдал анализ на уреаплазму, врач определяет наличие заболевания по показателям нормы. Стоит помнить, что наличие в организме уреаплазм или других чужеродных микроорганизмов вовсе не означает, что человек болен и нуждается в лечении. Не стоит самому пытаться диагностировать у себя инфекцию.

Если в качестве метода исследования был выбран ИФА, то в бланке будет обозначен титр (количество антител в пробе) и, в идеале, рядом с ним должно стоять слово «норма». В разных клиниках специфика анализа может отличаться, поэтому и «нормальная» цифра может быть разной — ориентироваться надо именно на слово. Также бывают ситуации, когда полученный результат признается сомнительным, тогда пациенту назначают другой анализ.

С результатом ПЦР разобраться немного проще: количество РНК уреаплазм в пробе не должно превышать отметку 10 4 КОЕ на 1 мл, если титр больше — это говорит о наличии патологической активности микроорганизмов. Эта же цифра считается нормой для результата культурального метода анализа (посева).

Анализы на уреаплазмоз — лишь одни из большого списка профилактических исследований, которые человеку стоит проходить хотя бы раз в год, стыдиться этого не нужно. Особенно внимательно к вопросу нужно подойти людям, состоящим в группе риска (обладающим ослабленным иммунитетом, часто меняющим половых партнеров, переболевшим заболеваниями органов малого таза).

www.kp.ru


Смотрите также